Sedikit Info tentang Imunogenicity

Maaf penulisan berterabur sebab mengalami kepayahan mencari perkataan Bahasa yang sesuai.

Ujian immunogenicity dan cerakin immunogenicity

Immunogenicity (IM) ujian adalah satu langkah yang perlu dalam pembangunan mana-mana dadah bioterapeutik. Strategi inovatif yang telah digunakan untuk mengurangkan immunogenicity potensi molekul-molekul besar. PEGylation, struktur humanized, dan kimera konstruk telah terbukti untuk pelbagai peringkat untuk menjadi langkah-langkah yang berkesan untuk memastikan bahawa keberkesanan dadah biologi dan keselamatan tidak terjejas oleh tindak balas imun pesakit sendiri. Walau bagaimanapun, tiada ini reka bentuk merekacipta memastikan bahawa bioterapeutik akan kebal daripada masalah penolakan pesakit dan ketoksikan. Dengan ketibaan biosimilars atau bersamaan ubat bioterapeutik generik, ujian immunogenicity akan mungkin masih diperlukan walaupun apabila jenama asal dadah mempunyai immunogenicity diterima.

Ini adalah kerana tidak seperti molekul kecil ubat generik yang mempunyai struktur kimia yang sama seperti mereka yang terdahulu, biosimilars, yang dihasilkan oleh proses yang berbeza, atau pada skala yang berbeza, walaupun apabila menggunakan proses yang sama, mungkin mempunyai variasi kecil dalam struktur kimia dan tahap berhadas, sekali gus memperlihatkan reaksi imunogenik yang berbeza apabila diberikan pada manusia.

Draf terbaru panduan mengenai biosimilars yang dikeluarkan oleh FDA pada bulan Februari 2012, "Pertimbangan Saintifik Menunjukkan Biosimilarity Rujukan Produk" menyatakan bahawa, sekurang-kurangnya, dua immunogenicity kajian yang berasingan perlu dijalankan untuk membandingkan biosimilar mana-mana produk rujukan:

"(1) kajian premarket powered untuk mengesan perbezaan yang besar dalam tindak balas imun di antara kedua-dua produk dan (2) kajian postmarket direka untuk mengesan perbezaan yang lebih halus dalam immunogenicity."

(Lihat baris 548-559)

Di samping itu, petunjuk draf seterusnya menyatakan yang berikut:

"Tempoh susulan hendaklah ditentukan berdasarkan (1) kursus masa untuk generasi tindak balas imun (seperti pembangunan antibodi meneutralkan, sel-pengantara tindak balas imun), dan jangkaan klinikal sekuelanya (dimaklumkan oleh pengalaman dengan rujukan produk), (2) kursus masa kehilangan tindak balas imun dan sekuelanya klinikal berikutan pemberhentian terapi, dan (3) panjang pentadbiran produk. Sebagai contoh, minimum susulan tempoh untuk ejen kronik ditadbir harus satu tahun, melainkan jika tempoh yang lebih pendek boleh dibenarkan oleh penaja. "(Lihat baris 592-599)

Pilihan Kaedah Ujian immunogenicity

Para saintis biofarmaseutikal boleh memilih dari beberapa teknologi untuk melaksanakan ujian immunogenicity. Satu antigen kembar merapatkan assay telah digemari sejak kaedah sedemikian, sekali dioptimumkan, boleh digunakan untuk ujian immunogenicity di mana-mana spesis tuan rumah. Oleh itu, cerakin IM yang sama boleh digunakan untuk kajian haiwan awal dan kajian klinikal pada manusia. Setiap platform teknologi mempunyai kelebihan dan kekurangan:

ELISA adalah yang terbukti, kos rendah teknologi, terbuka platform untuk mengesan afiniti tinggi anti-dadah antibodi (ADAs). Ia mempunyai toleransi dadah yang unggul, tetapi mungkin terlepas ADAs pertalian rendah disebabkan keperluan pencairan sampel yang lebih tinggi dan langkah-langkah mencuci pelbagai yang boleh mengganggu lemah terikat kompleks ADA dadah. ELISA dapat mengesan ADAs selepas asid penceraian antibodi dadah complexed.

NID ANP ® IM ELISA cerakin boleh digunakan dalam serum kemas tanpa perlu bagi pencairan sampel. Di samping itu, ia hanya memerlukan satu mencuci langkah, itu ketara meningkatkan ELISA assay prestasi IM (penerbitan berkaitan). PEG IM ELISA juga telah berjaya dibangunkan menggunakan kaedah ini (penerbitan berkaitan).

Permukaan Plasmon Resonance (SPR, Biacore) IM assay, telah ditunjukkan untuk menjadi berkesan dalam pengesanan ADAs pertalian rendah, tetapi keseluruhan tidak sebagai sensitif seperti ELISA disebabkan konfigurasi assay label bebas dan keperluan bagi pencairan sampel. Ia menunjukkan dadah toleransi yang tinggi untuk ADAs pertalian rendah, tetapi tidak boleh digunakan dengan asid penceraian beredar kompleks. Kaedah ini memerlukan pelaburan dalam instrumentasi yang berdedikasi mahal. Masalah yang serupa juga wujud dalam interferometri Bio-Lapisan (BLI) Dip dan Baca asai IM berasaskan.

Electrochemiluminescence (ECL) IM assay adalah sangat serupa dengan ELISA dalam prestasi dengan tuntutan sensitiviti yang lebih baik daripada penggunaan label electrochemiluminescent. Walau bagaimanapun, kelemahan yang serupa dengan pengesanan afiniti rendah ADAs disebabkan oleh keperluan untuk pencairan sampel dan langkah mencuci akhir masih wujud di samping kos yang jauh lebih tinggi dalam peralatan dan reagen, apabila berbanding dengan ELISA biasa. Kaedah ini memerlukan pelaburan dalam instrumentasi yang berdedikasi mahal.

Cerakin immunogenicity Rapid menggunakan jalur ujian imunokromatografi adalah asai IM baru dibangunkan kaedah yang tidak memerlukan pencairan sampel dan langkah-langkah mencuci, itu mampu mengesan ADAs pertalian kedua-dua tinggi dan rendah. Ia adalah sangat toleran sampel asid dipisahkan. Cerakin NID ® pesat ANP IM boleh digunakan untuk bukan sahaja ujian sampel pesakit semasa ujian klinikal, tetapi yang lebih penting pemantauan yang berhampiran pesakit reaksi imunogenik, terutamanya selepas dadah biologi / biosimilar diluluskan (penerbitan berkaitan). ANP menawarkan pelbagai produk assay IM pesat dan perkhidmatan yang menggunakan kedua-dua pembaca pegang tangan dan pemeriksaan throughput yang tinggi (HTS) pembaca.

Cabaran dalam Pengesanan ADAs: Kompleks imun dan endogen Mengganggu Protein

Kompleks imun

ADAs dalam pesakit imun sudah boleh terikat kepada dadah bioterapeutik dalam beredar kompleks imun, terutamanya dalam kehadiran dadah yang berlebihan. Melainkan dipisahkan dari kompleks, ADA tidak akan dikesan dalam cerakin mana-mana IM mana-mana format. Pendekatan tipikal kepada cabaran ini adalah untuk melaksanakan asid penceraian pra-rawatan sampel untuk membebaskan ADA dari kompleks imun, maka selepas peneutralan, segera menjalankan cerakin IM. Cerakin IM akan dijalankan serta-merta selepas peneutralan untuk mencegah kompleks imun dari pembaharuan.

Protein endogen dan Gangguan Sasaran

Gangguan protein endogen boleh menyebabkan keputusan yang salah dalam ujian immunogenicity dalam apa jua format. Untuk antibodi monoklonal dan bioterapeutik serupa yang berfungsi dengan mengikat dan menyekat protein penyakit bersekutu yang aktif, molekul sasaran dadah dengan sendirinya boleh mewujudkan sebuah kompleks merapatkan atau sandwic dengan reagen konjugat dadah di assay IM. Ini membawa kepada hasil positif palsu dalam ujian IM dalam ketiadaan ADA.

Asid penceraian dengan sendirinya tidak akan menyelesaikan masalah ini. Pendekatan lain yang boleh bekerja melibatkan menggunakan antibodi berasingan menyekat yang akan mengikat mengganggu protein sasaran sebelum menjalankan cerakin immunogenicity. Setelah disekat, molekul sasaran boleh tidak lagi bentuk merapatkan kompleks dengan reagen konjugat dadah. Walau bagaimanapun, ini menyekat antibodi boleh dipisahkan dari molekul sasaran apabila asid penceraian, lantas menghapuskan kesan pembetulan mereka. Jika ditambah dengan serta-merta selepas langkah peneutralan dalam proses penceraian asid, blocker tidak akan mempunyai masa yang cukup untuk mengikat protein sasaran sejak assay IM akan dijalankan dengan segera.

Pendekatan yang paling mudah adalah untuk mengekstrak tak boleh balik atau mengumpul protein mengganggu endogen sebelum menjalankan cerakin IM. NID ® NPX4000 Pengekstrakan Protein Mengganggu Kit membolehkan penyingkiran tidak dapat dipulihkan protein ini mengganggu endogen dengan melampirkan antibodi khusus anda menghalang atau pengikat kepada zarah diaktifkan, pretreating sampel dengan zarah ini, maka dgn memisahkan mereka dengan interferents terikat. Lebih daripada 99% daripada sasaran dadah mengganggu boleh dikeluarkan oleh mudah untuk menggunakan zarah tanpa menjejaskan tahap ADA. Kami telah mendapati bahawa zarah ini menggunakan antibodi kurang ketara menyekat atau pengikat daripada kaedah konvensional.